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技術文章 / article
細胞株建株時質量控制與穩(wěn)定性說明
原載自：anjunxi.com[技術資料頻道] 2025-12-16 瀏覽次數(shù)：34
細胞株一旦“落戶”實驗室，就會伴隨整個項目周期。然而，一份傳代30次后悄然變異的基因組，足以讓千萬投入瞬間歸零。因此，在建株階段就把“質量”與“穩(wěn)定性”寫進細胞DNA，是生物藥、疫苗、基因治療共同的“第一課”！
一、來源“驗明正身”
無論來自組織原代或是商用庫，均需三證合一：STR圖譜、細胞種屬鑒定報告、病原體“九項”陰性證明。建株前用ATCC數(shù)據(jù)庫比對8個核心位點，匹配度≥80%方可入庫；同步做支原體16S PCR和桿菌肽瓊脂培養(yǎng)，雙陰性才允許進入下游擴增，避免“隱形感染”在后續(xù)放大階段爆發(fā)。
二、單克隆化“一夫一妻”
有限稀釋法結合高通量成像，每孔確認僅一個細胞；96 h后拍照留檔，確保單克隆源性。此步驟可把異質性壓到低，為后續(xù)穩(wěn)定性測試提供“干凈”起點。經(jīng)驗顯示，跳過單克隆的混合群，30代后基因組SNV增加3–5倍，產量下降20%以上。
三、兩級庫“時空雙鎖”
按GMP理念建立MCB與WCB，每支凍存管用10%DMSO、程序降溫盒-1℃·min?¹降至-80℃，再轉入液氮氣相。MCB限傳5代，WCB限傳10代；任何實驗只能動用WCB，確保原始“種子”永遠封存。
四、基因組“快照”留底
建株完成即做全基因組測序，建立“基線指紋”；后續(xù)每10代復測，差異位點≤20個且不在關鍵調控區(qū)判為合格。若發(fā)現(xiàn)p53、Ras等驅動突變，即使生長更快也要整批淘汰，防止“高產但致癌”的隱患。
五、表型“雙軸”驗證
產量軸：連續(xù)3批14 d fed-batch，目標蛋白滴度CV＜10%；質量軸：N-糖譜、電荷異構體、SEC-HPLC單體比例與基線相比差異≤5%。兩項同時達標，才算“穩(wěn)定性”過關。
六、污染“雷達”長開
庫檢每半年做一次“14天桿菌肽+Hoechst”雙法支原體抽檢；新進胎牛血清先做7 d指示細胞培養(yǎng)，確認無CPE才允許用于擴增。把“0污染”從口號變成可量化數(shù)據(jù)。
七、數(shù)據(jù)“終身追溯”
從組織塊到最終WCB的每一次傳代、凍存、復蘇、檢測，全部錄入LIMS系統(tǒng)，生成二維碼烙印在凍存管。10年后若臨床批件要求復盤，可30 min內調出完整鏈路。
細胞株的質量不是“測”出來的，而是“建”出來的。只有把身份鑒定、單克隆化、兩級庫、基因組快照、表型雙軸、污染雷達、數(shù)據(jù)追溯七步固化成SOP，才能讓細胞在60代后仍是當初那個“少年”，為后續(xù)工藝放大和臨床申報節(jié)省至少6個月、降低30%失敗成本。
