細(xì)胞株開發(fā)是抗體藥物CMC的起點(diǎn)和基礎(chǔ)，細(xì)胞株的好壞直接決定生產(chǎn)成本、工藝復(fù)雜度和產(chǎn)品質(zhì)量，開發(fā)穩(wěn)定細(xì)胞株的過程包括：

　　宿主細(xì)胞的選擇，表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染，單克隆化以及高表達(dá)細(xì)胞株的篩選。目前大部分的抗體藥物都是選用的CHO細(xì)胞，但原始CHO細(xì)胞系流轉(zhuǎn)到不同的實(shí)驗(yàn)室和公司，經(jīng)過不同的培養(yǎng)、馴化、改造和重新克隆后形成了不同種類的CHO細(xì)胞系。這些不同CHO細(xì)胞系之間的形態(tài)、生長、表達(dá)、代謝，甚至基因組都有較大差異。宿主細(xì)胞的選擇除了考慮研發(fā)周期、成本以及后期整體的生產(chǎn)成本，還需要有清晰的歷史背景信息。

　　表達(dá)載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染開始是指將表達(dá)抗體的目的基因構(gòu)建到載體上，再將該載體轉(zhuǎn)染進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)。常用于哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、病毒轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，需要根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇。理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率、低細(xì)胞毒性和對正常生理學(xué)的影響小，并且易于使用和具有可重復(fù)性等特點(diǎn)，所以在正式開展轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前還要做多項(xiàng)預(yù)試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。

　　篩選高表達(dá)單克隆細(xì)胞株是細(xì)胞株構(gòu)建的關(guān)鍵步驟，衡量標(biāo)準(zhǔn)包括抗體表達(dá)量、產(chǎn)品的純度、翻譯后修飾、代謝穩(wěn)定性等。常用的篩選克隆的方法包括：有限稀釋法、流式細(xì)胞儀分選法、半固體培養(yǎng)基篩選法等。

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